bestbio@163.com
服务热线：021-33921235
登录
说明书下载
产品概述
product description
贝博® BBproExtra® 酵母核蛋白提取试剂盒提供全套试剂，适用于从各种酵母中提取核蛋白。提取过程简单方便。制备的核蛋白纯度高，保持天然活性，绝少交叉污染。
本试剂盒含有的蛋白酶抑制剂混合物，阻止了蛋白酶对蛋白的降解，为提取高纯度的蛋白提供了保证。
本试剂盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白质电泳、免疫沉淀、ELISA、转录活性分析、Gel shift凝胶阻滞实验、酶活性测定等下游蛋白研究实验。
本试剂盒提取的蛋白为具有天然蛋白构象的活性蛋白。
本试剂盒中不含有EDTA，与金属螯和层析等下游应用兼容。
本试剂盒提取的蛋白样本含有高浓度的盐成分，不可直接用于2D电泳，如下游实验需要直接用于等电聚焦、双向电泳，请使用贝博其他货号的试剂盒。也可以将最后样品除盐后再用于2D电泳，用脱盐柱脱盐处理（相关产品BB-38113）。
保存温度
2-8℃
注意事项
1. 蛋白酶抑制剂未开盖使用前也可以2-8℃储存。开盖使用后-20℃储存。
2. 蛋白酶抑制剂在2-8℃低温时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
3. 试剂拆封后请尽快使用完！
2. 蛋白酶抑制剂在2-8℃低温时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
3. 试剂拆封后请尽快使用完！
有效期
一年
检测方法
WB,IP等
适用样本
酵母
产品特点
1. 使用方便，提取蛋白不需经过研磨、反复冻融、超声破碎等前处理。
2. 将蛋白提取的时间缩短至1小时-2小时。
3. 含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。
4. 紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。
5. 蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含6种独立的蛋白酶抑制剂；每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性。
2. 将蛋白提取的时间缩短至1小时-2小时。
3. 含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。
4. 紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。
5. 蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含6种独立的蛋白酶抑制剂；每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性。
仪器准备
1. 离心机
2. 振荡器
3. 涡旋混匀器
4. 移液器
5. 冰箱
6. 冰盒
2. 振荡器
3. 涡旋混匀器
4. 移液器
5. 冰箱
6. 冰盒
试剂准备
1. PBS缓冲液
2. 蛋白定量试剂盒
2. 蛋白定量试剂盒
耗材准备
1. 离心管
2. 吸头
3. 一次性手套
2. 吸头
3. 一次性手套
使用注意事项
1. 预实验很重要。必须要做预实验，在正式实验之前取少量样本优化实验条件，并像正式样本一样认真进行，看实验结果是否可行，实验条件是否适合自己的样本。由于生物样本的多样性，不同样本的实验条件通常差异较大，同种细胞的不同模型下需要的实验条件也可能不同，为了避免浪费正式样本和试剂，一定要提前预实验优化实验条件。
2. 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
3. 实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
4. 蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。
5. 可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。
2. 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
3. 实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
4. 蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。
5. 可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。
使用方法
1. 提取液制备：
每500 μl蛋白提取液D中分别加入2 μl蛋白酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。
2. 酵母培养物，在4℃，1000×g条件下离心5-10分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集酵母沉淀。
3. 用PBS洗涤酵母两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。
4. 每100 μl体积酵母沉淀物中加入200 μl酵母核蛋白提取液A，混匀后，在30℃条件下保温15分钟。
5. 在1000×g条件下离心5-10分钟，弃上清，收集酵母沉淀。
6. 用500 μl PBS洗涤酵母一次，离心收集菌体。
7. 酵母沉淀物中加入300-500 μl酵母蛋白提取液B，充分混匀。
8. 在37℃或室温条件下轻微振荡45-90分钟。
9. 在1000×g条件下离心5-10分钟，收集沉淀，弃上清。
10. 用500 μl PBS洗涤沉淀。离心收集沉淀。
11. 沉淀中加入400 μl酵母核提取液 C，高速涡旋15秒混匀，然后在振荡器上振荡15-45分钟。
12. 高速涡旋振荡5秒，然后在4℃，2000×g条件下离心5分钟，吸取上清，留沉淀。上清即为胞质蛋白。
13. 在沉淀中加入200 μl冷的核蛋白提取液D，充分混匀。
14. 置振荡器上振荡30-40分钟。
15. 在4℃，12000×g条件下离心5分钟。
16. 将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到酵母核蛋白。
17. 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
每500 μl蛋白提取液D中分别加入2 μl蛋白酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。
2. 酵母培养物，在4℃，1000×g条件下离心5-10分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集酵母沉淀。
3. 用PBS洗涤酵母两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。
4. 每100 μl体积酵母沉淀物中加入200 μl酵母核蛋白提取液A，混匀后，在30℃条件下保温15分钟。
5. 在1000×g条件下离心5-10分钟，弃上清，收集酵母沉淀。
6. 用500 μl PBS洗涤酵母一次，离心收集菌体。
7. 酵母沉淀物中加入300-500 μl酵母蛋白提取液B，充分混匀。
8. 在37℃或室温条件下轻微振荡45-90分钟。
9. 在1000×g条件下离心5-10分钟，收集沉淀，弃上清。
10. 用500 μl PBS洗涤沉淀。离心收集沉淀。
11. 沉淀中加入400 μl酵母核提取液 C，高速涡旋15秒混匀，然后在振荡器上振荡15-45分钟。
12. 高速涡旋振荡5秒，然后在4℃，2000×g条件下离心5分钟，吸取上清，留沉淀。上清即为胞质蛋白。
13. 在沉淀中加入200 μl冷的核蛋白提取液D，充分混匀。
14. 置振荡器上振荡30-40分钟。
15. 在4℃，12000×g条件下离心5分钟。
16. 将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到酵母核蛋白。
17. 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
常见问题分析
1. 蛋白浓度低？
处理部分酵母样本时可能没有裂解完全，导致蛋白浓度低。只要适当延长试剂BCD的处理时间即可。最好在持续振荡的条件下处理，没有振荡器也可间隔几分钟用吸头吹打混匀。
酵母核蛋白丰度较低，在条件允许的情况下，加大酵母的上样量。
2. 用什么方法定量蛋白？
建议用BCA法。不适合用Bradford法，因为试剂D中含有干扰Bradford法的组份，导致定量不准。如果已经进行过透析处理或者用脱盐柱改换过缓冲体系，则可以用Bradford法定量。
3. 提取时出现胶状沉淀？
蛋白提取液处理产物中有时会出现少量透明胶状物，属正常现象。该透明胶状物为含有基因组DNA等的复合物。不检测和基因组DNA结合特别紧密的特定蛋白的情况下，可以直接离心取上清进行后续实验即可；如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白，则可以通过超声处理，300w/10秒间隔10秒，超声3分钟，随后离心取上清用于后续实验。
4. 提取的蛋白具有活性吗？
本试剂盒不含有离子型去垢剂组份，不破坏蛋白的结构，没有对蛋白质之间原有的相互作用的破坏，蛋白均保持其天然构象和活性。
处理部分酵母样本时可能没有裂解完全，导致蛋白浓度低。只要适当延长试剂BCD的处理时间即可。最好在持续振荡的条件下处理，没有振荡器也可间隔几分钟用吸头吹打混匀。
酵母核蛋白丰度较低，在条件允许的情况下，加大酵母的上样量。
2. 用什么方法定量蛋白？
建议用BCA法。不适合用Bradford法，因为试剂D中含有干扰Bradford法的组份，导致定量不准。如果已经进行过透析处理或者用脱盐柱改换过缓冲体系，则可以用Bradford法定量。
3. 提取时出现胶状沉淀？
蛋白提取液处理产物中有时会出现少量透明胶状物，属正常现象。该透明胶状物为含有基因组DNA等的复合物。不检测和基因组DNA结合特别紧密的特定蛋白的情况下，可以直接离心取上清进行后续实验即可；如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白，则可以通过超声处理，300w/10秒间隔10秒，超声3分钟，随后离心取上清用于后续实验。
4. 提取的蛋白具有活性吗？
本试剂盒不含有离子型去垢剂组份，不破坏蛋白的结构，没有对蛋白质之间原有的相互作用的破坏，蛋白均保持其天然构象和活性。
参考文献
1. Yingchao Xu et al.
Cellular mechanism for the improvement of multiple stress tolerance in brewer's yeast by potassium ion supplementation
International Journal of Food Science & Technology 2019
2. RuhanJiang et al.
A study on the degradation efficiency of fluoranthene and the transmembrane protein mechanism of Rhodococcus sp. BAP-1 based on iTRAQ
Science of The Total Environment 2020
3. Yang Zhang et al.
A Peptide from Budding Yeast GAPDH Serves as a Promising Antifungal against Cryptococcus neoformans
Microbiology Spectrum 2022
Cellular mechanism for the improvement of multiple stress tolerance in brewer's yeast by potassium ion supplementation
International Journal of Food Science & Technology 2019
2. RuhanJiang et al.
A study on the degradation efficiency of fluoranthene and the transmembrane protein mechanism of Rhodococcus sp. BAP-1 based on iTRAQ
Science of The Total Environment 2020
3. Yang Zhang et al.
A Peptide from Budding Yeast GAPDH Serves as a Promising Antifungal against Cryptococcus neoformans
Microbiology Spectrum 2022
-
优惠促销Promotion
-
轻松下单Order
-
在线留言Online message
-
帮助中心Help center